線粒體提取試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

簡(jiǎn)要描述：貨　　號(hào)：P0040
名　　稱：線粒體提取試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
規(guī)　　格：50T/100T
價(jià)　　格：320.00/580.00

產(chǎn)品型號(hào)：

所屬分類(lèi)：其他自產(chǎn)即用試劑

更新時(shí)間：2025-02-21

廠商性質(zhì)：經(jīng)銷(xiāo)商

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詳情介紹

線粒體提取試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)	50T	320.00
線粒體提取試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)	100T	580.00

線粒體提取試劑盒使用說(shuō)明

一，試劑盒組份

組份	P0040 (50T)	P0040 (100T)
Lysis Buffer	50 mL	100 mL
Mito-Wash Buffer	25 mL	50 mL
Store Buffer	5 mL	10 mL

二，說(shuō)明

線粒體提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動(dòng)物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。

三，操作步驟

1. 樣本處理

a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨組織20次；

b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800 × g 5~10 min離心收集細(xì)胞。計(jì)數(shù)。每次提取需要5 × 10⁷個(gè)細(xì)胞，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨30~40次；

2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管，4℃，1000× g 離心5 min；

3. 取上清，加入一新的離心管中，4℃，1000× g 再次離心5 min。

4．取上清，加入一新的離心管中，4℃， 12,000 × g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線粒體沉淀在管底；

5. 在線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀，4℃，1000× g 離心5 min；

6．取上清，加入一新的離心管中，4℃， 12,000 × g 離心10 min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管底；

6. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

四注意事項(xiàng)：
1. 為保證獲得完整的線粒體，*是全程低溫操作。第二是快速。第三，在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞是制備線粒體的zui關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度，不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。
3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。