福爾根(Feulgen)染色液說(shuō)明書(shū)

福爾根(Feulgen)染色液反應(yīng)原理：

DNA 經(jīng)酸（1mol/L HCl）水解后，嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵被打開(kāi)，并且使脫氧核糖與磷酸間的磷酯鍵斷開(kāi)，在脫氧核糖的一端形成游離的醛基。醛基在原位與 Schiff 試劑結(jié)合，形成紫紅色化合物，使細(xì)胞內(nèi)含有 DNA的部位呈紫紅色陽(yáng)性反應(yīng)。紫紅色的產(chǎn)生是因?yàn)榉磻?yīng)產(chǎn)物的分子內(nèi)有醌基（醌基是一個(gè)具有顏色的發(fā)色團(tuán)），所以含有 DNA 的部位，呈紫紅色。而RNA用此法處理后則分解。

保質(zhì)期：2-8℃避光6個(gè)月。

福爾根(Feulgen)染色液操作步驟

本染色液采用經(jīng)典方法配制，染色方法可參考文獻(xiàn)或者實(shí)驗(yàn)室留傳下來(lái)的方法，或者參考下面的方法。

處理準(zhǔn)備標(biāo)本，同時(shí)準(zhǔn)備60℃的１Ｍ的鹽酸溶液。

１．切片脫蠟入水(洋蔥表皮等類(lèi)似標(biāo)本，固定，梯度乙醇后入水)。

２．切片放入60℃的 1M的鹽酸溶液中約5-15分鐘(水解時(shí)間因標(biāo)本及固定液不同而有差異，)。

３．滴加或者浸入Schiff試劑，反應(yīng)30-60分鐘（此步為避光反正，在通風(fēng)處，用完試劑請(qǐng)馬上蓋嚴(yán)）。

４．吸干或者甩去Schiff試劑（如果不用重亞硫酸鹽溶液洗，此步可直入水沖洗）

５．用重亞硫酸鹽溶液清洗,，用完蓋嚴(yán)（一般此步可省，直接用蒸餾水洗）。

６．在蒸餾水中充分沖洗。

7．封片（要保存染色結(jié)果，請(qǐng)經(jīng)酒精脫水，二甲苯透明并封片）。 如果只簡(jiǎn)單的立刻觀察，可直接在有少量水的情況下壓片。顯微鏡觀察。

福爾根(Feulgen)染色液注意事項(xiàng)

1．此試劑為接到訂單后我公司再配制，保質(zhì)期一般為6個(gè)月。但因?yàn)榻?jīng)常開(kāi)蓋等原因造成SO2流失，試劑保質(zhì)期會(huì)變短，如果染色結(jié)果不佳，可適當(dāng)加入少量重亞硫酸鈉（鉀），加入量一般為0.1g/L

2．雖然Feulgen法是DNA的特異染色方法，但如果延長(zhǎng)水解時(shí)間并在室溫下進(jìn)行反應(yīng)， Schiff試劑也與醛、酮、醇和縮醛磷脂起反應(yīng)，因此用Feulgen法檢測(cè)DNA時(shí)必須嚴(yán)格控制鹽酸水解的時(shí)間和溫度。為減少假陽(yáng)性和非特異性染色必須做對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

３．由于Schiff試劑能與醛基結(jié)合，故不能用含醛的固定液固定組織，常用Carnoy固定液。Bouin液不適用于Feulgen反應(yīng)，因?yàn)楣潭ㄒ褐泻^多的酸，可將DNA水解，影響染色反應(yīng)。